Estudo do anticorpo monoclonal 56G anti-Streptococcus mutans: papel na prevenção e colonização da superfície de corpos de prova confeccionados com resina composta / Evaluation of a 56G Anti - Streptococcus mutans monoclonal antibody: role in the prevention of colonization on surface of composite resin

Neste trabalho foi realizada uma análise, in vitro, da capacidade do anticorpo monoclonal (Acmo) 56G anti-Streptococcus mutans de impedir ou interferir na aderência e colonização de S.mutans (cepa GS5) à superfície de corpos de prova confeccionados com Resina Composta Híbrida TPH (Dentsply). Vinte corpos de prova foram preparados, desinfetados com gluconato de clorexidina ou esterilizados por radiação gama com cobalto 60 e incubados em tubos de ensaio contendomeio sacarosado e um inóculo de S. mutans. Metade dos corpos de prova constituiu o grupo tratado e, por isso,recebeu uma alíquota do Acmo; a outra metade destinou-se ao grupo controle. As películas bacterianas aderidas sobre as pastilhas de resina dos grupos tratado e controle foram quantificadas e comparadas através da dosagem de carboidratos e proteínas presentes nas mesmas, além da determinação do número de UFC/ml. Verificou-se que não havia diferença entre a desinfecção com clorexidina e a esterilização por radiação gama, e que o biofilme bacteriano formado na presença doAcmo não diferia daquele formado na sua ausência, tanto nas dosagens de carboidratos e proteínas (p=0,577 e p=0,705, respectivamente) quanto na microbiológica (p=0,488). Conclui-se que o Acmo 56G não foi efetivo na prevenção da colonização da superfície dos corpos de prova confeccionados em resina pelo S. mutans.

Efeito do anticorpo monoclonal 56G sobre o crescimento de Streptococcus mutans em caldo e no acúmulo de placa bacteriana in vitro / Effect of monoclonal antibodies 56G on the growth of Streptococcus mutans in broth and

O anticorpo monoclonal (Acmo) anti-Streptococcus mutans 56G foi analisado quanto ao efeito na aderência e crescimento da placa bacteriana in vitro, e quanto ao crescimento em caldo e no comprimento da cadeia do estreptococo. O Acmo foi purifi cado em proteína A - Sepharose e testado em ELISA frente a quatro cepas de S. mutans (ATCC 35668, SP, GS5, CD28A). O Acmo reconheceu com maior intensidade a cepa GS5. As placas bacterianas formadas in vitro na presença do Acmo apresentou menos carboidrato total (polissacarídeo extracelular) que o grupo controle e essa diferença foi signifi cante (p>0,001). A placa bacteriana do grupo tratado, formada sobre uma lamínula de vidro, era diferente da placa controle e apresentava agregados menores que cobriam a lamínula quase completamente. O Acmo 56G não infl uenciou o crescimento bacteriano, nem o comprimento da cadeia de S. mutans.Os resultados desse trabalho sugerem que o Acmo testado deve reconhecer a glicosiltransferase (GTF) de S. mutans presente na superfície bacteriana, interferindo na síntese de glucano por essa enzima.

Production of monoclonal antibodies against Streptococcus mutans antigens

Several studies have been conducted in the last decades aiming to obtain an anti-caries vaccine, however some studies have demonstrated cross reactivity between Streptococcus mutans surface antigens and the human cardiac tissue. In this work, the reactivity of five anti-Streptococcus mutans monoclonal antibodies (MoAb) (24A, 56G, C8, E8 and F6) was tested against oral streptococci, cardiac antigens and skeletal and cardiac myosins, aiming to evaluate the specificity of these MoAb. The hybrid producers of immunoglobulins of the IgG2b class were cloned by limit dilution and expanded in vivo. MoAb were tested by ELISA. The hybrid 24A reacted with S. mutans CCT 1910, S. salivarius CCT 0365 and S. pyogenes T23. No reactivity difference was observed among the tested species. Cross reactivity with heart and cardiac myosin was not confirmed and only reaction with myosin of skeletal muscle was observed (p = 0.0381). The hybrid 56G reacted with all the tested microorganisms and there was statistically significant difference between S. mutans and S. pyogenes T23 (p < 0.001). This hybrid also reacted with myosin of skeletal muscle (p = 0.0095). C8, E8 and F6 presented low reactivity against oral streptococci strains and no reactivity against cardiac antigens. The data of this study showed that the 24A and 56G anti-S. mutans MoAb presented reactivity with S. pyogenes and S. salivarius, reinforcing the occurrence of common antigens between these species. The tested MoAb presented low cross-reactivity with myosin of skeletal muscle, but anti-heart activity could not be confirmed.

Diversos estudos foram realizados nas últimas décadas com o intuito de se obter uma vacina anticárie dentária, mas alguns trabalhos têm demonstrado reatividade cruzada entre antígenos de superfície de Streptococcus mutans e tecido cardíaco humano. Neste trabalho, foi testada a reatividade de cinco anticorpos monoclonais (AcMo) anti-Streptococcus mutans (24A, 56G, C8, E8 e F6) contra estreptococos orais, antígenos cardíacos e miosinas esquelética e cardíaca, no intuito de avaliar a especificidade desses AcMo. Os híbridos produtores de imunoglobulinas da classe IgG2b foram clonados por diluição limite e expandidos in vivo. Os AcMo foram testados por ELISA. O híbrido 24A reagiu com S. mutans CCT 1910, S. salivarius CCT 0365 e S. pyogenes T23. Nenhuma diferença de reatividade foi detectada entre as espécies analisadas. Reatividade cruzada com coração e miosina cardíaca não foi confirmada, existindo somente reação com miosina de músculo esquelético (p = 0,0381). O híbrido 56G reagiu com todos os microrganismos testados e houve diferença estatisticamente significante entre S. mutans e S. pyogenes T23 (p < 0,001). Este híbrido também reagiu com miosina de músculo esquelético (p = 0,0095). C8, E8 e F6 apresentaram baixa reatividade contra cepas de estreptococos orais e nenhuma reatividade com antígenos cardíacos. Os dados deste trabalho demonstraram que os AcMo 24A e 56G anti-S. mutans reagiram com S. pyogenes e S. salivarius, confirmando a existência de antígenos comuns entre essas espécies. Esses AcMo avaliados apresentaram baixa reatividade cruzada com miosina de músculo esquelético, porém a atividade anticoração não foi confirmada.

Estudo da interação entre anticorpos monoclonais anti-Streptococcus mutans e / Evaluation of the interactions between anti-Streptococcus mutans monoclonal antibodies and oral streptococci antigens

Nesse trabalho estudou-se a reatividade de dois anticorpos monoclonais (Acmo) anti-Streptococcus mutans (24A e 56G) desenvolvidos no Laboratório de Imunologia da Faculdade de Odontologia de São José dos Campos-UNESP, frente às cepas de estreptococos orais (S. salivarius, S. mutans e S. pyogenes) pelo ELISA e Western blot. Estes anticorpos eram da classe IgG2b e foram purificados em proteína A. O Acmo 56G mostrou ser o mais reativo com S. mutans. Testado no Western Blot (WB) com o antígeno citoplasmático (AgC) de S.mutans, 56G marcou uma única banda de 53kDa. Com o antígeno de superfície (AgSu) e com células inteiras dos microrganismos estudados, 56G reagiu com componentes de pesos moleculares mais elevados como 116 e 155 kDa. Foi detectada reatividade cruzada do Acmo 56G, no WB, com outros estreptococos orais (S. pyogenes, S. salivarius, S. sobrinus), constatando o compartilhamento de antígenos entre as espécies testadas, o que pode ser um fator importante no desenvolvimento de doenças, como a febre reumática.

Production of monoclonal antibodies against Streptococcus mutans antigens.

Several studies have been conducted in the last decades aiming to obtain an anti-caries vaccine, however some studies have demonstrated cross reactivity between Streptococcus mutans surface antigens and the human cardiac tissue. In this work, the reactivity of five anti-Streptococcus mutans monoclonal antibodies (MoAb) (24A, 56G, C8, E8 and F6) was tested against oral streptococci, cardiac antigens and skeletal and cardiac myosins, aiming to evaluate the specificity of these MoAb. The hybrid producers of immunoglobulins of the IgG2b class were cloned by limit dilution and expanded in vivo. MoAb were tested by ELISA. The hybrid 24A reacted with S. mutans CCT 1910, S. salivarius CCT 0365 and S. pyogenes T23. No reactivity difference was observed among the tested species. Cross reactivity with heart and cardiac myosin was not confirmed and only reaction with myosin of skeletal muscle was observed (p = 0.0381). The hybrid 56G reacted with all the tested microorganisms and there was statistically significant difference between S. mutans and S. pyogenes T23 (p < 0.001). This hybrid also reacted with myosin of skeletal muscle (p = 0.0095). C8, E8 and F6 presented low reactivity against oral streptococci strains and no reactivity against cardiac antigens. The data of this study showed that the 24A and 56G anti-S. mutans MoAb presented reactivity with S. pyogenes and S. salivarius, reinforcing the occurrence of common antigens between these species. The tested MoAb presented low cross-reactivity with myosin of skeletal muscle, but anti-heart activity could not be confirmed.